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生物样品分析测定

来源:环球体育官方首页

  第一节 概述 生物药物分析的对象—药物所到之生物体的体液、 生物药物分析的对象 器官、组织、排泄物等。 生物药物分析的目标—母体药物和代谢产物 生物药物分析的目标 生物药物分析的意义 药物质量的正确评价 临床合理用药 第一节 概述 生物药物分析的特点 生物样品中被测组分的存在形式多样 原型药(游离型)、结合型、代谢物、缀合物等 被测组分浓度低(10-6-10-9g/ml),变化幅度 大 样品干扰物质多,部分样品稳定差 样品量少 要求较快提供结果 测定数据的处理和阐明有时不太容易 第二节 药物在生物体内的存在状态与生物转化 药物在生物体内的存在状态 药物代谢——保证临床用药的安全、合理 药物代谢 和有效 药物代谢的部位:肝脏、肾、脾、肺、肠粘膜、 药物代谢的部位: 胎盘等 药物代谢反应 第一阶段(一相):P450等催化下的氧化、还原、 第一阶段(一相): ): 水解等反应,增大极性 第二阶段(二相):与葡萄糖醛酸、硫酸盐等结合, 第二阶段(二相): ): 进一步增大极性,随尿排出 第三节 生物样品的制备 常用生物样品 生物样品的选取原则 能够反映出浓度与药效之间的关系 易于获得 便于处理 根据不同目的和要求进行选取 第三节 生物样品的制备 常用生物样品 常用生物样品的种类、 常用生物样品的种类、特点与采集 血浆(plasma) 血样—— 血清(serum) 血样 全血(whole blood) 尿液(urine)——用于药物剂量回收、药物肾清除率 尿液 及生物利用度的研究 ※ 尿液药物浓度变化大,应测定一定时间内尿中药 物总量。 ※ 尿液与血液中药物的相关性差。 ※ 尿中药物大多呈缀合状态。 第三节 生物样品的制备 常用生物样品 常用生物样品的种类、 常用生物样品的种类、特点与采集 唾液(saliva)——用于药物浓度监测和药代动力学 唾液 研究 其他——动物脏器组织匀浆等 其他 样本的代表性 ——力求取样条件标准化 样品的贮存 血样—离心,冷冻保存 尿液-立即测定,否则应冷藏或加防腐剂 第三节 生物样品的制备 样品预处理 提取方法的选择依据 药物的理化性质 -酸碱度、极性、挥发性、可能的生物转化途 径等 药物的浓度范围 药物测定的目的 生物样品的类型 样品处理与分析技术的关系 第三节 生物样品的制备 样品预处理 药物的提取 蛋白质处理 利用蛋白质脱水沉淀 有机溶剂、中性盐等 利用蛋白质形成不溶性盐沉淀 酸性沉淀剂(TCA、高氯酸、苦味酸等) 酸性沉淀剂 重金属盐(Zn2+、Cu2+) 重金属盐 其他方法 加热、离心、超滤和透析、 加热、离心、超滤和透析、酶消化法 第三节 生物样品的制备 样品预处理 药物的提取 缀合物(结合物) 缀合物(结合物)水解 酸水解—无机酸 酸水解 无机酸 ※ 简便快速,但专属性差,有可能造成被测物分解。 酶水解 葡萄糖醛酸苷酶(glucuronidase) 葡萄糖醛酸苷酶 芳基硫酸酯酶(arylsulfatase) 芳基硫酸酯酶 ※ 专属性强,一般不会造成被测物分解,但水解时间 长,费用高。 溶剂解 第三节 生物样品的制备 样品预处理 药物的提取 冷冻干燥 适用于 -大批量的生物样品 大批量的生物样品 -水溶性很强的样品 水溶性很强的样品 -挥发性样品 挥发性样品 -对热不稳定的样品 对热不稳定的样品 第三节 生物样品的制备 样品预处理 药物的分离与净化 液-液萃取 液萃取 萃取率:不低于50% 萃取率:不低于 影响提取率的因素 pH值 值 提取溶剂 离子强度 离子对提取 第三节 生物样品的制备 样品预处理 药物的分离与净化 液-固萃取 固萃取 固相提取柱(使用硅藻土、氧化铝、离子 固相提取柱(使用硅藻土、氧化铝、 交换树脂、活性炭等填充剂) 交换树脂、活性炭等填充剂) “干混合物”萃取 干混合物” 待测组分的富集 真空挥发或通气流挥发 衍生化处理 第三节 生物样品的制备 样品预处理 待测物的损失 吸附、化学降解、衍生化反应、络合、 吸附、化学降解、衍生化反应、络合、 蒸发 样品玷污 增塑剂 脂肪酸和酯类 其他 第四节 生物样品内药物分析方法 分析方法建立的一般步骤 以纯品进行测定 确定线性范围、最适测定浓度、灵敏度、最佳测定条件 等 空白样品测定 以水代替空白样品, 以水代替空白样品,添加对照品后测定 了解提取回收率和最低检测浓度的大致情况 空白样品中添加对照品后测定(回收率实验) 空白样品中添加对照品后测定(回收率实验) 实际样品测定 第四节 生物样品内药物分析方法 方法的评价 准确度(accuracy) 准确度( ) 回收率—相对稳定 回收率 与参比方法相比较—相关系数r 0.95 与参比方法相比较— 精密度( 精密度(precision) ) 各浓度点RSD不应大于15%,最低定量限不应大 于20%。 灵敏度 检测限(LOD)、定量限(LOQ)、最低检测浓度 第四节 生物样品内药物分析方法 方法的评价 方法的专属性( 方法的专属性(specificity) ) 注重考虑代谢物、 注重考虑代谢物、内源性物质和同时服用 药物的干扰 线性范围--相关系数r 0.99 线性范围 样品稳定性考察 长期贮存(-20 ℃/-70℃)、短期室温贮存 长期贮存 冷冻-解冻循环稳定性 冷冻 解冻循环稳定性 贮备液稳定性 第四节 生物样品内药物分析方法 常用测定方法 光谱法 紫外可见分光光度法 荧光分光光度法 色谱法 电泳法 免疫分析法

2021-11-28 04:32:54
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